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等度液相色譜分析儀在分析中保留時(shí)間改變的原因

更新時(shí)間:2018-05-17點(diǎn)擊次數(shù):2073
等度液相色譜分析儀是在經(jīng)典的液相色譜法基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的,其以液體作為流動(dòng)相,并采用顆粒極細(xì)的固定相的柱色譜分離技術(shù)。其分離機(jī)制與常規(guī)柱色譜相同,但填料更加精細(xì),需高壓泵推動(dòng),柱效高,分析速度快。與氣相色譜不同的是液相色譜中流動(dòng)相亦參與組分的分離過(guò)程,其組成、比例和pH值可靈活調(diào)節(jié),分離模式多樣。在實(shí)際操作中主要通過(guò)改變流動(dòng)相的組成來(lái)調(diào)節(jié)樣品在色譜柱的保留值和選擇性,從而使不同樣品得到分離。
色譜分析是以假定給定組分的保留值在分離條件不變時(shí)保留值恒定為基礎(chǔ)的。對(duì)標(biāo)準(zhǔn)的液相色譜程序而言,每個(gè)峰都對(duì)應(yīng)于一個(gè)組分,以標(biāo)準(zhǔn)品與樣品中組分的保留時(shí)間相對(duì)應(yīng)進(jìn)行鑒別。恒定的保留時(shí)間對(duì)分析設(shè)計(jì)排列的樣品很重要。
等度液相色譜分析儀分析中常涉及到組分的保留值。保留值發(fā)生改變可使已建立的方法不能繼續(xù)進(jìn)行下去,或引起分析周期太長(zhǎng),或者峰分不開(kāi)。應(yīng)該找出引起保留值變化的原因。
除上述條件之外,引起等度液相色譜分析儀保留變化的原因主要包括下列3種:
1柱-柱之間;
2日-日或日內(nèi):保留時(shí)間可能隨時(shí)間而變化,如溫度、柱溫、pH值等對(duì)柱性能有影響,通常是所有的峰提前或延遲。
3樣品-樣品間:偶爾也有樣品與標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間不同,可能是樣品介質(zhì)的影響。
以下重點(diǎn)討論造成日-日間和日內(nèi)保留時(shí)間變化的影響因素,它們主要是:
a分離條件控制差
除了色譜柱外,保留是溫度、流動(dòng)相組成和流速的綜合體現(xiàn),如果有一個(gè)條件變化,保留時(shí)間也會(huì)隨之發(fā)生變化。
b柱平衡慢
流動(dòng)相組成或溫度變化時(shí),柱在新條件下再平衡需要一定的時(shí)間,在柱達(dá)到*平衡錢(qián)不應(yīng)進(jìn)樣。
c柱鈍化
長(zhǎng)時(shí)間進(jìn)樣,柱會(huì)退化,強(qiáng)保留組分被柱不可逆的保留,導(dǎo)致所有組分保留減少。鍵合相層從填料微粒上剝落下來(lái),會(huì)導(dǎo)致某些組分的保留增加,而另一組分的保留減少。
d柱過(guò)載和樣品介質(zhì)相互作用
過(guò)大的樣品量超出柱的線性范圍,使保留減少。也可能是樣品本身過(guò)載,從其它方面影響保留。
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