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簡析二元高壓分析梯度液相色譜儀分析法

更新時間:2018-02-08點擊次數(shù):2781
1.原理
液相色譜是根據(jù)不同溶質(zhì)在流動相和固定相之間保留的差異進行分離和測定的方法。通常用容量因子k·來表征溶質(zhì)保留值得大小,k,=(tR-t0)/t0,k·
越大則該物質(zhì)保留越強。容量因子k·隨固定相、流動相濃度c、溫度的不同而變化。在固定相溫度不變的情況下有以下關(guān)系式:
lnk·=-Zlnc+b(Z和b為常數(shù))
由此可見,隨流動相濃度c增加,容量因子k·減小。Z是每種物質(zhì)的特征參數(shù),小分子Z一般為3-5,大分子Z一般為10-100。對于小分子的樣品,我們可以通過采用合適濃度的流動相來使每種物質(zhì)得到分離,即平常所用的等度液相色譜分析。若對于一個既有小分子,又有大分子的樣品(如含聚合物),由于Z相差較大,在相同的流動相濃度下,容量因子k·差距就非常大,簡單的講,在等度情況下,有時小分子的保留時間在4-5min,大分子保留時間可能在100min以上,更有甚者在有限的時間內(nèi)不出峰。
二元高壓分析梯度液相色譜儀梯度分析法就是為解決這個問題產(chǎn)生的。它是采用特殊的設(shè)備使流動相的濃度隨時間變化,對保留弱的用濃度小的流動相,對保留強的用濃度大的流動相,使各組分較為均勻的流出。例如對于某樣品用60%流動相、80%流動相和梯度(30min內(nèi)從60%-100%)的分離效果如下。
從上可以看出用60%流動相分離效果好,但用時150min,用80%流動相分離效果已經(jīng)很差了,用時仍達80min,而用梯度的方法分離效果很好,用時只有50min,另外,保留時間長的色譜峰沒有明顯變寬。
2.二元高壓分析梯度液相色譜儀設(shè)置方法
通常有兩種梯度方式,一種是低壓梯度,一種是高壓梯度。低壓梯度只用一個輸液泵,靠梯度單元中電磁閥開關(guān)時間的比例來控制AB液的比例實現(xiàn)流動相濃度的變化,例如需控制A:B=40:60,在很小的時間段如1秒,CD閥常關(guān),A閥開4/10秒,B閥開6/10秒,任意時間四個閥只有一個開,輸液泵流出的流動相AB液是一節(jié)一節(jié)相連的,經(jīng)混合器混合成一定比例的流動相。低壓梯度zui多可有四種流動相。
3.二元高壓分析梯度液相色譜儀注意事項及常見故障排除
1.更換流動相后,要用新流動相沖洗管路和脫氣機。
2.及時觀察兩個泵的壓力變化。如壓力變化過大,通常是其中一個泵抽空或不流液。
打開放空閥,用注射器在廢液管端吸,使排液順暢。
3.通常情況下,梯度基線是逐漸升高的,但如出現(xiàn)較大的鼓包是不正常的。原因很
多,可先用純甲醇沖洗整個儀器管路,或更換新配的流動相。
4.注意開機順序,依次是監(jiān)測器,付泵,主泵,脫氣機。有時會出現(xiàn)主泵控制不上
付泵的情況,可按主泵PUMP鍵測試,正常情況是按主泵PUMP鍵,付泵應與主泵同時開或關(guān)。出現(xiàn)錯誤時可將付泵再開一次。
5.梯度方法由于流動相的純度等問題易出現(xiàn)鬼峰,做完樣品后應打空白,樣品不積
空白中出現(xiàn)的峰。
6.100%水的流動相勤用勤配,防止霉變。
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